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何首乌的实验室检验检测流程

减小字体 增大字体 作者:本站  来源:本站整理  发布时间:2025-12-22 16:02:17

何首乌的实验室检验检测流程 
何首乌的实验室检验检测流程是一个严谨的质量控制体系,旨在全面评估药材的真伪、纯度、安全性及有效性。以下是对该全流程的详细解析。

一 样品接收与初步处理
实验室收到何首乌样品后,第一步是进行规范的登记和前处理。
信息登记与标识:为样品赋予唯一性编号,详细记录其名称、来源(产地、批次)、送检日期、送检人及指定的检测项目。
性状检查:依据《中国药典》等标准,检验员在自然光下观察药材的外观、色泽、表面特征(如皱缩不平、浅沟、横长皮孔样突起),检查质地和断面特征(特别是皮部是否具有类圆形异型维管束环列形成的“云锦花纹”),并嗅闻气味、品尝味道(气微,味微苦而甘涩)。此步骤可对药材品质进行初步判断。
样品制备:将药材在适宜温度下(如55℃)烘干,用粉碎机粉碎,并过筛(通常过四号筛),得到均匀粉末,用于后续的显微、薄层、含量测定等分析。
二 传统鉴别与常规检查
此阶段主要确认药材的真伪和基本质量。
显微鉴别:取粉末制作显微临时切片,在显微镜下观察其特有的组织构造和内含物。何首乌粉末的典型特征包括:草酸钙簇晶(直径10-160μm)、具缘纹孔导管、棕色细胞及淀粉粒等。此法对于鉴别炮制过的何首乌饮片尤为有用。
薄层色谱(TLC)鉴别:取样品粉末,加乙醇加热回流提取,滤液浓缩作为供试品溶液。同时制备何首乌对照药材溶液。将两种溶液点于同一硅胶G薄层板上,经特定的展开剂系统(如苯-乙醇或三氯甲烷-甲醇系统)展开,取出晾干后,在紫外光灯下检视。合格的何首乌样品,其供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上,应显相同颜色的荧光斑点。此法通过化学指纹图谱进行鉴别。
常规检查项目:
水分测定:通常采用烘干法或甲苯法,确保药材水分不超过规定限度(如不得过10.0%或12.0%),防止霉变。
总灰分测定:用于检查药材的无机杂质含量,通常规定限度不超过一定数值。
三 现代分子生物学鉴定
对于形态高度相似的近缘物种或混伪品,DNA分子鉴定技术提供了更精确的鉴别手段。
DNA提取:从样品中提取基因组DNA。针对炮制后DNA可能降解严重的情况,可采用改良CTAB法以获得质量较好的模板。
PCR扩增与检测:实验室可能使用商品化的何首乌探针法PCR鉴定试剂盒,或基于特定基因序列(如ITS2、psbA-trnH)设计引物进行等位基因特异性PCR(AS-PCR)​ 或PCR-RFLP分析。
在实时荧光定量PCR中,阳性结果通常表现为检测通道的Ct值小于或等于35,且扩增曲线呈明显的S型。
结果可通过琼脂糖凝胶电泳或更先进的毛细管凝胶电泳进行检测,后者具有灵敏度高、自动化、可定量等优势。
结果判读:通过是否扩增出特定大小的条带(如191bp)或特定的酶切图谱,来准确区分何首乌正品与其混伪品。
四 指标成分含量测定
含量测定是量化评价何首乌质量的核心,主要采用色谱技术。
高效液相色谱法测定二苯乙烯苷:

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